Prenez une culture de cellules progénitrices neurales induites ou de l’INPC, sur une plaque multi-patch avec revêtement de matrice extracellulaire.
Remplacez le support par des moyens d’induction glial et incubé. Les facteurs de croissance et les hormones dans les milieux facilitent la différenciation de l’APC dans les cellules précurseurs Gliali.
Changez le média en jours alternés pour la prolifération cellulaire. Ensuite, remplacez les médias par des astrocytes et des supports incubés.
Les nutriments spécifiques et les facteurs de croissance dans les médias guident la différenciation des cellules précurseurs Gliali dans les astrocytes.
Les changements des médias à des jours alternatifs favorisent la maturation des astrocytes.
Le véhicule change dans le neuro-deff-medio lorsque les cellules sont à 70% confluentes et continuent de changer le véhicule en jours alternés pendant trois semaines. Ne divisez pas les cellules pendant la différenciation. Après trois semaines, les cellules doivent exprimer le marqueur neuronal Tuj1.
Pour obtenir de multiples neurones matures et sous-types neuronaux, continuez à se différencier jusqu’à trois mois. Pour la différenciation de l’INPC spécifiquement vers une lignée gliale, modifiez le véhicule par un moyen d’induction de Glile, y compris 20 nanogrammes par millilitre du facteur de croissance épidermique pour induire la différenciation des cellules précurseurs de Glili. Retirez la moitié du véhicule et remplacez la moitié de la moitié de jour pendant environ deux semaines.
Au cours de cette période, les cellules doivent être divisées de 1 à 3 en présence de 10 inhibiteurs de la rhinase micromolaire lorsque 100% de confluence est atteint. Après deux semaines, il différencie davantage les cellules des astrocytes en modifiant le véhicule au milieu des astrocytes disponibles sur le marché lorsque les cellules sont presque confluentes et continuent de changer le véhicule chaque deuxième jour. Environ sept jours plus tard, les cellules commencent à exprimer des marqueurs d’astrocytes.